FOB重组单抗Protein A/G纯化流程

FOB重组单抗作为生物制药领域的重要产品，其纯化过程关系到产品纯度、活性及安全性。Protein A/G层析技术因能特异性结合单抗Fc段，在FOB重组单抗纯化中占据关键地位。合理设计纯化流程，可有效去除杂质、提升产品质量，满足后续生产与临床应用需求。以下从流程设计依据、核心操作步骤及优化方向展开阐述，为相关技术应用提供参考。

一、纯化流程设计依据

FOB重组单抗的分子结构特点与杂质构成，是Protein A/G纯化流程设计的核心依据。该类单抗含Fc结构域，可与Protein A/G配基高效结合，此特异性相互作用为靶向纯化提供基础。同时，发酵液中存在宿主细胞蛋白、核酸、内毒素及聚合体等杂质，不同杂质的理化性质差异较大，需通过多步骤层析组合实现分离。

流程设计需兼顾纯化效率与产品稳定性，例如Protein A/G层析的pH值、离子强度等条件，需匹配单抗与配基的结合特性，避免因环境因素导致单抗变性或活性降低。此外，纯化过程需符合GMP规范，确保操作可追溯、结果可重复，为后续质量控制提供保障。

二、核心纯化操作步骤

1、捕获层析阶段

捕获层析是纯化流程的第一步，核心目标是实现单抗的初步分离与浓缩。将预处理后的发酵液上样至Protein A/G层析柱，在适宜的缓冲体系（通常为中性pH）下，单抗Fc段与Protein A/G配基特异性结合，杂质则随流穿液去除。

上样结束后，采用高盐缓冲液进行洗涤，进一步去除非特异性结合的杂质（如部分宿主细胞蛋白），确保层析柱结合的目标产物纯度。洗涤过程需控制流速与缓冲液用量，避免目标产物流失。

2、精细纯化阶段

精细纯化以去除残留杂质、提升产品纯度为核心。经捕获层析洗脱的单抗样品，需调整缓冲液条件（如pH值、离子强度），上样至离子交换层析柱（如阳离子交换层析）。在此阶段，残留的宿主细胞蛋白、核酸及少量聚合体，因电荷差异与层析柱配基结合能力不同，可通过梯度洗脱实现分离。

洗脱过程中，需实时监测洗脱峰的紫外吸收值与电导率，收集目标峰组分。同时，通过SDS-PAGE、HPLC等检测手段，对收集的样品进行纯度分析，确保满足后续工艺要求。

3、抛光纯化阶段

抛光纯化是纯化流程的zui后一步，旨在去除微量聚合体与内毒素，保障产品安全性。采用凝胶过滤层析技术，利用分子筛选效应，使单抗分子与微量杂质（如聚合体、小分子杂质）因分子体积差异，在层析柱中洗脱体积不同，从而实现分离。

操作过程中，需控制层析柱流速与上样量，确保分离效果稳定。洗脱完成后，对目标样品进行内毒素检测（如鲎试剂法）与聚合体含量分析（如SEC-HPLC），确保产品符合质量标准。

三、流程优化方向

纯化流程需结合生产需求持续优化。在配基选择上，可采用高亲和力、高稳定性的重组Protein A/G配基，提升层析柱的载量与使用寿命；在工艺参数方面，通过实验设计（DOE）方法，优化上样量、洗脱梯度、缓冲液配方等参数，平衡纯化效率与产品质量。

此外，可引入连续层析技术，减少操作步骤、缩短纯化周期，降低生产成本。同时，加强过程分析技术（PAT）的应用，实时监控纯化过程中的关键质量属性，实现对流程的精准控制。

FOB重组单抗Protein A/G纯化流程需以产品质量为核心，结合分子特性与杂质构成，设计多步骤层析组合工艺。通过捕获、精细纯化、抛光纯化的有序衔接，可有效去除杂质、保障产品纯度与安全性。